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内容编辑TALEN基因编缉技术
分类: 编缉技术
发布时间: 2015-09-14 16:16
TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 技术是基于对DNA识别的TALEN臂和人工改造的核酸内切酶的切割域(FokⅠ)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALEN的DNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成，每个模块由34个氨基酸组成，其中第12和13位的氨基酸种类为可变的（RVDs），且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上，以及FokI的切割域形成二聚体后，可特异性对目标基因DNA实现切断。在非同源末端连接修复过程中，DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠、猪、牛、猴等各类模式动物的研究领域。
TALEN由四部分组成：N端序列，RVD，C端序列，FokI。利用Type II 限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点， 通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。TALEN系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性，在TALEN结合臂的引导下，发挥特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA，形成DSB（Double- Strand Breaks）,诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJ（Non- homologous End Joining）修复DNA，在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目（非3的倍数）的碱基，造成移码，形成对目标基因特异性KO的突变体。
TALEN由四部分组成：N端序列，RVD，C端序列，FokI。利用Type II 限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点， 通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。TALEN系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性，在TALEN结合臂的引导下，发挥特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA，形成DSB（Double- Strand Breaks）,诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJ（Non- homologous End Joining）修复DNA，在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目（非3的倍数）的碱基，造成移码，形成对目标基因特异性KO的突变体。