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内容编辑自然流产(SA)小鼠模型
分类: 生殖
发布时间: 2021-03-25 00:00
方法：Clark经典反复流产小鼠模型(CBA/J与DBA/2）
品系：雌性CBA/J，雄性DBA/2，雄性BALB/c小鼠
类型：成品模型
名称：Mouse Model for Spontaneous Abortion (SA)
编号：LM80603
品系：雌性CBA/J，雄性DBA/2，雄性BALB/c小鼠
类型：成品模型
名称：Mouse Model for Spontaneous Abortion (SA)
编号：LM80603
模型评价
流式细胞数检测PBMCs中Th17/Treg细胞比例：
分离小鼠PBMCs后，按工作浓度加入佛波酯，Ionomycin，Monensin，37°C孵育4~6h，设同型对照管和检测管。Fc受体阻断剂封闭后，分别加入CD4表面抗体染色，混匀，室温避光孵育15min后每管按操作要求先后加入固定液和破膜/溶血液，洗涤后实验管分别加入2种配色抗体，对照管加入同型对照抗体。避光孵育后，加入洗涤剂离心弃上清，重悬细胞，24h内上机检测。以CD4直方图射门，以散点图染色阳性表示Th17细胞和Treg细胞，用Cellsquest软件获取并分析数据。（一个样本分为两种染色方案，Th17：CD4-FITC、IL-17-PE；Treg：CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE）
RT-PCR检测PBMCs中FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5的表达：
分别提取各组PBMCs总RNA，并进行RNA纯度和完整性鉴定；设计引物，逆转录成cDNA，以β-actin为内参，然后进行实时荧光定量RT-PCR；采用相对定量法利用Ct计算FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA的相对量。
流式细胞数检测PBMCs中Th17/Treg细胞比例：
分离小鼠PBMCs后，按工作浓度加入佛波酯，Ionomycin，Monensin，37°C孵育4~6h，设同型对照管和检测管。Fc受体阻断剂封闭后，分别加入CD4表面抗体染色，混匀，室温避光孵育15min后每管按操作要求先后加入固定液和破膜/溶血液，洗涤后实验管分别加入2种配色抗体，对照管加入同型对照抗体。避光孵育后，加入洗涤剂离心弃上清，重悬细胞，24h内上机检测。以CD4直方图射门，以散点图染色阳性表示Th17细胞和Treg细胞，用Cellsquest软件获取并分析数据。（一个样本分为两种染色方案，Th17：CD4-FITC、IL-17-PE；Treg：CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE）
RT-PCR检测PBMCs中FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5的表达：
分别提取各组PBMCs总RNA，并进行RNA纯度和完整性鉴定；设计引物，逆转录成cDNA，以β-actin为内参，然后进行实时荧光定量RT-PCR；采用相对定量法利用Ct计算FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA的相对量。
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